第一种是高温脱毒:50度的热水中浸泡10分钟~数小时,适用于休眠器官、接穗或种子。
第二种热空气处理:在温热箱内,35~40℃,几十分钟~数月。对茎尖效果较好,热处理后取较大茎尖培养,可提高成活率与脱毒率。注意:易受伤,掌握温度与时间。
步骤1、茎尖剥离
无菌条件下,将感染病毒的地黄无菌苗剥去幼叶,切取带2个叶原基的茎尖;
步骤2、茎尖脱毒培养:
S1、茎尖电流刺激处理:
将步骤1切取的茎尖浸泡于无菌水中,然后进行弱电流刺激处理;
其中,弱电流刺激处理的条件为:于体积分数为1%的TAE电泳缓冲液中,在5-30mA电流条件下刺激处理1-10min,得电流刺激茎尖;
S2、茎尖培养:
将步骤S1的电流刺激茎尖接种于培养基内,并培育30-45d,经脱毒检测后得脱毒怀地黄。
优选的,所述电流刺激的条件为:于15mA电流条件下刺激处理1-10min。
优选的,所述电流刺激的条件为:于15mA电流条件下刺激处理5min。
优选的,所述叶原基茎尖的尺寸为0.3×(0.05-0.1)mm
优选的,所述步骤S2的培养基以MS液体培养基为溶剂,向其中加入0.5mg·L
优选的,将所述培养基的pH值调至5.8-6.0,并于高温高压下灭菌20min。
优选的,所述高温高压的条件为121℃蒸汽灭菌。
番茄种子可以用高锰酸钾消毒。番茄种子可用25℃高锰酸钾灭菌。根据当地常见疾病,常用的方法有两种。温汤浸种,将种子放入55℃的温水中,保持水温浸泡种子15分钟左右,通过这样的处理,可以有效预防溃疡病、叶霉病等疾病。
用磷酸三钠浸泡种子:常温下用清水浸泡种子3~4小时,然后在清水中加入适量的磷酸三钠溶液,继续浸泡20分钟左右,最后捞出种子清洗。通过这样的治疗,可以有效地预防和治疗病毒性疾病。
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